Extração de DNA de morangos

Paula Cruz | 17:50 | 10 comentários

     
     O DNA é um ácido nucléico. E que os ácidos nucléicos foram originalmente descobertos em 1868 por Friedrich Meischer, um biólogo suíço, que isolou o DNA das células do pus em bandagens. Embora Meischer suspeitasse que os ácidos nucleicos pudessem conter informações genéticas, ele não tinha como confirmar sua ideia.

     Em 1943, Oswald Avery e seus colegas na Rockefeller University, mostraram que alterações no DNA de uma bactéria como o Streptococcus pneumoniae poderia transformar bactérias não infecciosas em infecciosas. Esses resultados indicaram que o DNA era a parte da célula que guardava as informações sobre suas características. O papel das informações do DNA foi melhor estudado em 1952, quando Alfred Hershey e Martha Chase demonstraram que para produzir novos vírus, um vírus bacteriófago injetou DNA, não proteína, na célula hospedeira.
     Então, os cientistas criaram a teoria sobre o papel informativo do DNA, mas ninguém sabia como essas informações eram codificadas e transmitidas. Muitos cientistas achavam que a estrutura da molécula era importante para esse processo.
     Em 1953, James D. Watson e Francis Crick desvendaram a estrutura do DNA na Cambridge University. Basicamente, Watson e Crick usaram as técnicas e os dados de modelagem molecular de outros pesquisadores (incluindo Maurice Wilkins, Rosalind Franklin, Erwin Chargaff e Linus Pauling) para decifrar a estrutura do DNA.
       Com todas as informações acima, que nos foram cedidas nas aulas teóricas, chegamos à conclusão que toda a informação necessária para criar um organismo encontra-se no DNA. Esta molécula é usada durante o período de vida de um organismo para fornecer instruções para milhões de processos celulares que ocorrem constantemente. E que, para melhor estudá-lo, o ideal é isolar do DNA.
     Para isolar o DNA utilizamos os seguintes materiais:
 
MATERIAL
·         -Morangos
·         -Tubos de ensaio (15 mL)
·         -Microtúbulo (1,5 mL)
·         -Bastão de vidro
·         -Pipeta de Pauster
·         -Faca
·         -Centrífuga
·         -Banho-Maria
·         -Acetato de Sódio
·         -Álcool etílico PA (8°C)
·         -Detergente líquido
·         -Água destilada
·         -Funil de vidro
·         -Algodão  

PROCEDIMENTO PASSO A PASSO:

1. Triturar e macerar, com auxílio de uma faca e um bastão de vidro, ½ morango.
  • O morango precisa ser macerado para que ocorra o rompimento da parede celular e os produtos químicos utilizados para a extração cheguem mais facilmente em todas as suas células.




  • O DNA genômico é formado por moléculas muito longas (lembre-se que cada cromossomo é formado por uma única molécula de DNA). Por exemplo, o maior cromossomo humano possui 263 milhões de pares de bases. Assim sendo, é praticamente impossível extrair o DNA sem que inúmeras quebras mecânicas ocorram durante os procedimentos de extração.

2. Transferir o material vegetal para um tubo de ensaio de15ml, onde no qual se deve acrescentar 1 mL de detergente líquido neutro e homogeneizar com auxílio de um bastão de vidro.


  • Os detergentes são normalmente empregados para dissolver lipídios (gorduras).  

  • Como a membrana celular tem em sua composição química uma grande quantidade de lipídios, sob a ação do detergente, estes se tornam solúveis e são extraídos junto com as proteínas que também fazem parte das membranas.

3. Acrescentar 3 mL de água destilada e homogeneizar outra vez com o bastão de vidro, feito isto, incubar em banho Maria a 65°C por 20 min.


  •   Neste momento, a temperatura ela ajuda no rompimento da membrana celular.
1.    4. Após os 20 min., centrifugar os tubos de ensaio a 4.000 rpm por 5 min. 


  •      A centrifugação do material é necessária para que haja a separação do material mais denso (precipitado) e do material menos denso (sobrenadante).

  • Obs.: Sempre colocar os tubos de modo que eles fiquem nivelados, evitando assim a trepidação da centrífuga.

 

1.   5. Transferir 500 µL do sobrenadante para um microtúbulo (1,5 mL) com o auxílio de um funil e algodão.




  •       O funil e o algodão atuam como um filtro para as partículas que ainda existem no sobrenadante. 


1.    6. Acrescentar 100 µL de acetato de sódio 3M e pH 7 no microtúbulo e homogeneizar por inversão. 



  •       O acetato de sódio atua como solução tampão impedindo assim a degradação do DNA, além de fornecer íons que são necessários para a fase de precipitação do DNA. 


  7. Acrescentar 500 µL de álcool etílico resfriado (8°C) e homogeneizar por inversão.




  • O DNA extraído das células do morango encontra-se na fase aquosa da mistura, ou seja, dissolvido na água. Na presença de álcool e de concentrações relativamente altas de Na+(fornecidas pelo sal) o DNA sai de solução, ou seja, ele é precipitado. 
 
8.    8. Com adição do álcool gelado ocorre a precipitação de uma grande quantidade de fita de DNA do morango, e em alguns segundos podemos visualizar a fragmentos de DNA, que se manifesta em uma forma que se assemelha a um fio de lã ou uma nuvem. 

  •       A molécula de DNA pode ser extremamente longa, mas seu diâmetro é de apenas 2 nanômetros, visível apenas em microscopia eletrônica. Assim sendo, o que se vê após a precipitação é um emaranhado formado por milhares de moléculas de DNA.





Referências Bibliográficas

          Borges-Osório,M.R.; Robinson,W.M. Genética Humana, Editora Artmed, Porto
Alegre, 2001.

          Snustad, D.P.; Simmons, M.J. Fundamentos de Genética, Editora Guanabara-
Koogan, Rio de Janeiro, 2008.




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10 comentários:

  1. Respostas
    1. se vc nao sabe apreciar um trablho entao melhor ficar quieto

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    2. Foi ótimo saber sobre extração de DNA,está me ajudando bastante.Gente ignorante é assim mesmo...

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  2. Ótimo! Fizemos a mesma experiência em nosso projeto "O POTENCIAL DOS JOGOS DIDÁTICOS E DA EXPERIMENTAÇÃO COMO ESTRATÉGIA FACILITADORA DA APRENDIZAGEM NO ENSINO DE CIÊNCIAS" - financiado pela FAPESB e obtivemos o mesmo resultado.

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  3. Adorei, ajudou-me bastante

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  4. é isso que eu como,uma coisa complicada :p

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  5. fds que merda até a tua mae de 4 fazia melhor

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