Home � Educação � Preparo de Meio de Cultura

Preparo de Meio de Cultura

Paula Cruz | 14:00 | 0 comentários

Na última terça-feira, 30 de abril de 2010, fomos ao laboratório de biotecnologia da EMBRAPA para participar de uma aula prática de preparo de meio de cultura de tecidos vegetais.

A cultura in vitro de células ou tecidos vegetais requer a atilização de meios de cultura adequados. De maneira geral, as células em cultura necessitam do mesmo tipo de nutrientes que a planta intacta. Todavia, para evitar a contaminação por fungos e/ou bactérias, os meios devem se esterelizados por autoclave ou, em casos particulares, por filtração.

Os componentes dos meio de cultura podem dividir-se em elementos minerais, vitaminas e em alguns casos é preciso reguladores de crescimento vegtal (fitormônios).

O meio de culturas que pruduzimos seguiu a formulação do meio MS (Murashige e Skoog, 1962).

Mãos à massa.

Para produção de 1000ml (1L) utilizamos:

20ml de cada macronutrientes (IA, IB, IIA, IIB e IIIA),
10ml de micronutrinetes,
2ml de vitaminas,
30g de sacarose,
2,5ml de BAP (0,5ppm),
2ml de AIA (0,2ppm),
0,04g de cisteína,
2g de phytagel.

Primeiro foram pesados a sacarose, a cisteína e o phytagel, em seguida foram separados os macro e micronutrientes. Em um becker grande, foi colocado 50ml de água destilada, 20ml de cada macronutriente e 10ml de cada micronutrientes, e com ajuda de uma pipeta automática de 1ml de capacidade foram colocados as Vitaminas, o BAP e AIA. Em seguida, foi colocada a sacarose, a cisteína e uma bailarina dentro do becker. A bailarina (peça de metal) é um recurso utilizado para deixar a solução homogêna com o auxílio de um agitador magnético, onde este após ligado induz a bailarina a produzir um movimento circular no fundo do becker e com este movimento "mistura" a solução. Após agitar a solução é preciso medir o pH, pois este vai depender da finalidade do meio de cultura. Como o meio que preparamos era para Pimenta do reino, o pH ideal é 5,8. Na medição do pH verifivamos que ele estava mais ácido do que precisávamos, então, foi colocada uma solução básica para atingir o valor ideal do nosso meio de cultura. Depois de alcançar o pH desejado foi depositado as 2g de phytagel, e a solução foi aquecida com o rabo quente até a dissolução completa do phytagel, após ocorrer essa dissolução está pronto o meio de cultura. Os 1000ml de meio de cultura foram distribuídos em 100 tubos de ensaio, onde estes foram vedados e introduzidos no autoclave por 20 mim. Efim o meio ficou pronto!